产品货号:
JN5047
中文名称:
第一链cDNA合成预混液(去除基因组DNA)
英文名称:
2×BalbScript Plus 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix(gDNA Purge)
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品是以mRNA或者总RNA为模板,高效合成第一链cDNA。本制品含有反转录反应所需的全部试剂(BalbScript II反转录酶,RNase Inhibitor,Oligo(dT)18,Random N6,dNTPs)。反应时只需要加入RNA模板和水即可,操作简单,降低操作过程中的污染。制品中含有去基因组成分gDNA Purge,以RNA为模板进行cDNA第一链合成时,可以同步去除基因组DNA污染,反应结束后,75℃加热5分钟,就可以失活反转录酶,RNA酶抑制剂。合成的第一链cDNA能直接用于PCR或荧光定量PCR的模板,第二链cDNA的合成或线性RNA扩增,也可用于需要用带有放射性或非放射性核苷酸标记第一链cDNA的实验。
- 本制品采用耐高温逆转录酶,大幅提高热稳定性和cDNA合成效率;
- 本制品中添加的BalbScript II反转录酶无RNase H活性,可避免第一链cDNA合成过程中,RNA/DNA杂交模板链中RNA降解,保证cDNA合成的质量;
- 本制品中Random N6和Oligo(dT)18引物比例经过优化,可均匀合成样品中的cDNA;
- 本制品中含有去基因组成分,逆转录时可同步去除基因组DNA污染。
- 本制品提供了2×BalbScript Plus No RT Control,用于配制无逆转录酶对照反应,检验RNA模板中是否存在基因组DNA残留。
组分 | 50T | 100T |
2×BalbScript Plus 1st cDNA Synthesis SuperMix | 500μL | 1mL |
gDNA Purge | 50μL | 100μL |
2×BalbScript Plus No RT Control | 50μL | 100μL |
RNase-Free Water | 1mL | 1mL×2 |
保存:-20℃
- 用DEPC处理实验用到的所有实验器材,或者购买已经证明无核酸酶的实验用具,实验过程戴手套并经常更换手套,避免RNA酶的污染。
- 确保所用试剂中无RNA酶污染。
- 试剂盒要严格密封保存。在逆转录过程中,所有管子要确保扣严。
- 纯化过的RNA必须保证不含有盐,金属离子,乙醇和苯酚,以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。
- 为保证逆转录反应的有效进行,需使用高质量的RNA模板。
- 当模板含量较低或后续PCR扩增片段过长时可以适当延长逆转录时间。
- 2×BalbScript Plus 1st cDNA Synthesis SuperMix、gDNA Purge及2×BalbScript Plus No RT Control含有甘油,使用前请充分混匀后并短暂离心收集至管底再进行使用。
一、cDNA第一链合成
试剂融化后,各组分混匀短暂离心后置于冰上。
- 按下表加入各成分配制反应体系,并移液器轻轻混匀后短暂离心至管底。
成分 用量 2×BalbScript Plus 1st cDNA Synthesis SuperMix 10μL 模板RNA 总RNA(0.1ng~1μg)
mRNA(≥10pg)
特异性RNA(≥0.01pg)gDNA Purge 1μL RNase-Free Water 至20μL - No RT Control反应(可选)
用于配制无逆转录酶对照反应,检验RNA模板中是否存在基因组DNA残留。成分 用量 2×BalbScript Plus No RT Control 10μL 模板RNA 总RNA(0.1ng~1μg)
mRNA(≥10pg)
特异性RNA(≥0.01pg)gDNA Purge 1μL RNase-Free Water 至20μL - 反应程序
温度 时间 50℃ 15min 85℃ 5s
相关搜索:第一链cDNA合成预混液(去除基因组DNA),去除基因组DNA,去gDNA,第一链cDNA:MasterMix,反转录,逆转录,cDNA合成预混液,mRNA,总RNA